6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在18-24℃，湿度保持在45-65%。超净台洁净度应达到100级。
6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或**液洗手**，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用75%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。
参照《药品卫生检验方法》 《中国药品检验标准操作规范》中 (无菌检查法)章节 中华人民共和国医药行业标准 YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》
1．工作室应矮小、平整，面积只需4米2左右，高2.2—2.3米，内部装修应平整、光滑，无凹凸不平或棱角等，四壁及屋顶应用不透水之材质，便于擦洗及
**
2．室内采光面积大，从室外应能看到室内情况。
3．为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室。
4．无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及供**空气用紫外灯，**紫外灯离工作台以1米为宜 ，其电源开关均应设在室外。
5．无菌室与缓冲间进出口应设拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门应错开，以免空气对流造成污染。
6．无菌室的使用与管理
（1） 无菌室应保持清洁整齐，室内仅存放必须的检验用具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、玻璃铅笔等。&不要放与检测无关的物品
（2） 室内检验用具及凳桌等保持固定位置，不随便移动。
（3） 每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液喷雾**空气，后紫外灯**半小时
（4） 定期检查室内空气无菌状况，**数应控制在10个以下，发现不符合要求时，应立即彻底****。/无菌室无菌程度的测定方法：取普通肉汤琼脂平板、改良马丁培养基平板各3个（平板直径均9厘米），置无菌室各工作位置上，开盖曝露半小时，然后倒置进行培养，测**总数应置37℃温箱培养48小时；测霉菌数则应置27℃温箱培养5天。**`霉菌总数均不得超过10个为 。
（5） 无菌室**前，应将所有物品置于操作之部位（待检物例外），然后打开紫外灯**30分钟，时间一到，关闭紫外灯待用
（6） 进入无菌室前，必须于缓冲间更换**过的工作服、工作帽及工作鞋。
（7） 操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，不喧哗，以保持环境的无菌状态。
器材及场所的****
微生物检验用器材及场所必须进行**或**处理，不同的对象采用不同的处理方法
1． 高压蒸汽**: 工作服、口罩、稀释液等，置高压**锅内，一般采用121℃**半小时,当然不同的培养基有不同的要求,应分别处理
3． 高温干燥**： 各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160℃**2小时
4． 一 般**: 无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行**，必须用其他方法进行**处理，采用2%石炭酸或来苏儿水溶液擦拭**，工作人员的手也用此法进行**
5． 空气的**： 开启紫外灯照射30—60分钟 即可。
操作要领 
准备工作
1． 先进行无菌室空间的**，开启紫外灯30—60分钟
2． 检验用的有关器材， 搬入无菌室前必须分别进会****
3． 操作人员必须将手清洗**，穿戴好无菌工作衣、帽和鞋，才能进入无菌室
4． 进入无菌室后再一次**手部，然后才进行检验操作
操作过程注意事项
1． 动作要轻，不能太快，以免搅动空气增加污染；玻璃器皿也应轻取轻放，以免破损污染环境
2． 操作应在近火焰区进行。
3． 接种环、接种针等金属器材使用前后均需灼烧，灼烧时先通过内焰，使残物烘干后再灼烧**
4． 使用吸管时，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必须用
洗耳球操作。
5． 观察平板时不好 开盖，如欲沾取菌落检查时，必需靠近火焰区操作，平皿盖也不能 大开，而是上下盖适当开缝。
6． 进行可疑致病菌涂片染色时，应使用夹子夹持玻片，切勿用手 直接拿玻片，以免造成污染，用过的玻片也应置于
**液中浸泡**，然后再洗涤。
7． 工作结束，收拾好工作台上的样品及器材，后用**液擦拭工作台。
建造条件
1.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。
2.严防一切**器材和培养基污染，已污染者应停止使用。
3.无菌室应备有工作浓度的**液，如5%的甲酚溶液，70%的酒精，0.1%的新洁尔灭溶液，等等。
4.无菌室应定期用适宜的**液**清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。
5 需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法**。
6.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照**30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照**20分钟。
7.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70%的酒精棉球**外表面。
8.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。
9.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。
10.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧**，待冷却后，方可接种培养物。
11.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的**桶内**，24小时后取出冲洗。
12.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3%的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽**后洗涤。
13.凡带有活菌的物品，必须经**后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。
14.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底**，直至重复检查合乎要求为止。
发布者：赵一达